色谱柱
Accura BioPro IEX 和 BioPro IEX 是在非特异性吸附极低的亲水性聚合物上引入强阴离子/强阳离子交换基团的离子交换色谱柱。无孔型不会发生孔内扩散，因此具有高分离能力，适用于生物医药品和核酸药物的特性解析及质量控制，也可用于病毒载体等大分子生物制品的分离。对于这些易吸附成分，采用生物惰性涂层硬件的 Accura BioPro IEX 尤其有效。BioPro IEX 多孔型具有高吸附容量和高回收率，也适用于实验室规模纯化。
| 强阴离子交换色谱柱 Accura BioPro IEX QF BioPro IEX QF |
强阳离子交换色谱柱 Accura BioPro IEX SF BioPro IEX SF |
强阴离子交换色谱柱 BioPro IEX QA |
强阳离子交换色谱柱 BioPro IEX SP |
|
|---|---|---|---|---|
| 基质 | 亲水性无孔聚合物 | 亲水性多孔聚合物 | ||
| 颗粒径 (µm) | 3, 5 | 5 | ||
| 离子交换基团 | -CH2N+(CH3)3 | -CH2CH2CH2SO3- | -CH2N+(CH3)3 | -CH2CH2CH2SO3- |
出厂时对离子 |
Cl- | Na+ | Cl- | Na+ |
| 离子交换容量 (meq/mL-resin) |
0.09 | 0.24 | 0.09 | 0.09 |
| 动态吸附容量 (mg/mL-resin) |
12 (BSA) | 10 (human-IgG) | 110 (BSA) | 70 (human-IgG) |
| 使用温度范围 | 4-80°C（Accura BioPro IEX） 4-60°C（BioPro IEX） |
4-60°C | ||
| 使用 pH 范围 | 2-12 | |||
| 色谱柱材质 | 生物惰性涂层不锈钢（Accura BioPro IEX） PEEK（BioPro IEX） |
PEEK | ||
在相同条件下比较 Accura BioPro IEX SF 与市售色谱柱对单克隆抗体的分离。Accura BioPro IEX SF 的峰形更尖锐，对电荷异质体相关峰也表现出良好分离。
| Eluent | A) 10 mM MES-NaOH (pH 6.6) B) 10 mM MES-NaOH (pH 6.6) containing 1.0 M NaCl 0-20%B (0-15 min) |
|---|---|
| Flow rate | 0.5 mL/min for 4.6 mmI.D., 0.378 mL/min for 4.0 mmI.D. |
| Temperature | 25°C |
| Detection | UV at 280 nm |
| Sample | Bevacizumab |
BioPro IEX QF 可良好分离硫代磷酸酯型寡核酸中的 PO 型杂质。
1. DNA 15mer, 12PS, 2PO (5’-T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^TTT-3’)
2. DNA 15mer, 13PS, 1PO (5’-T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^TT-3’ )
3. DNA 15mer, All PS
(5’-T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T-3’ )
^=Phosphorothioated
| Column | BioPro IEX QF (5 µm), 100 X 4.6 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) 10 mM NaOH B) 10 mM NaOH containing 1.0 M NaClO4 40-70%B (0-15 min), 100%B (15-20 min) |
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 25°C |
| Detection | UV at 260 nm |
| Injection | 6 µL (each 3.3 nmol/mL) |
该示例使用不同柱长的 Accura BioPro IEX QF 分析单链 RNA（反义链）和双链 RNA（siRNA）。核酸采用离子交换模式分离时，较长色谱柱有时可获得更好的分离效果；本例中 150 mm 柱的分离度最高。Accura BioPro IEX 还提供 150 mm 和 250 mm 柱长，适用于高分离分析。
1. antisense strand
2. siRNA duplex
| Column | Accura BioPro IEX QF (5 µm) |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 1.0 M NaClO4 |
| Flow rate | 0.5 mL/min |
| Temperature | 60°C |
| Detection | UV at 260 nm |
| Injection | 8 µL (each 5 nmol/mL) |
使用填料相同但色谱柱硬件材质不同的色谱柱分析寡核酸。PEEK 色谱柱可观察到吸附，而 Accura 从首次进样起即可获得稳定峰面积和良好峰形。对于容易吸附的核酸，Accura BioPro IEX 无需预处理即可进行分析。
| Column | 5 µm, 100 X 4.6 mmI.D |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 1.0 M NaClO4 25-40%B (0-15 min), 40%B (15-20min) |
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 60°C |
| Detection | UV at 260 nm |
| Injection | 4 µL (5 nmol/mL) |
| Sample | 21mer RNA |
各填料批次的 BioPro IEX SF 均具有较高分离能力，可获得优异的批间重现性，适用于生物医药品质量控制。
| Column | BioPro IEX SF (5 µm), 100 X 4.6 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 6.5) B) 20 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 6.5) containing 0.2 M NaCl 0-50%B (0.5-30 min) |
| Flow rate | 0.5 mL/min (180 cm/hr) |
| Temperature | 25°C |
| Detection | UV at 215 nm |
| Injection | 10 µL |
| Sample | Humanized monoclonal IgG1 |
BioPro IEX QA 是以非特异性吸附极低的亲水性聚合物为基质的离子交换色谱柱，具有易与蛋白质相互作用的表面结构，因此对蛋白质表现出较高的动态吸附容量和回收率。
BSA 的动态吸附容量和回收率
| Dynamic binding capacity (mg/mL-resin, 10% breakthrough) |
Eluted amount (mg/mL-resin) |
Recovery* (%) |
|
|---|---|---|---|
| BioPro IEX QA | 126 | 120 | 95 |
| A公司 (porous Q type) | 73 | 58 | 79 |
| B公司 (porous Q type) | 100 | 35 | 35 |
Breakthrough curves（突破曲线）
| Column | BioPro IEX QA, 50 X 4.6 mmI.D. A公司 (porous Q type) 50 X 4.6 mmI.D. B公司 (porous Q type) 50 X 5.0 mmI.D. |
|---|---|
| Linear velocity | 180 cm/hr |
| Equilibration buffer | 20 mM Tris-HCl (pH 8.6) |
| Elution buffer | 20 mM Tris-HCl (pH 8.6) containing 1.0 M NaCl |
| Detection | UV at 280 nm |
| Sample | 1 mg/mL Bovine serum albumin (BSA) in equilibration buffer |
