mRNA 的 LC 分离

mRNA 已广泛用于疫苗及癌症、遗传性疾病等治疗药物的研发。HPLC 可用于 mRNA 的特性分析、质量控制和纯化。由于 mRNA 分子尺寸大且带负电荷，反相模式通常需要大孔径填料与离子对试剂，离子交换模式则需优化 pH、盐和添加剂。

反相模式分离

使用大孔径 Triart Bio C4 并在流动相中加入 TEA 等离子对试剂，可分离 RNA marker 与不同长度的 mRNA。生物惰性 Accura 硬件有助于抑制金属吸附并改善回收率。

Column	Accura Triart Bio C4 (3 µm, 30 nm), 100 X 2.1 mmI.D.
Eluent	A) TEA aqueous solution B) methanol
Temperature	80°C
Detection	UV at 254 nm
Sample	EGFP mRNA [996 nt], Cas9 mRNA [4521 nt]

阴离子交换模式下，可提高缓冲液 pH 或加入离子对型添加剂来改善峰形。高 pH NaOH 条件可获得尖锐峰形，但需采用低温和短分析时间以抑制样品降解；在 Tris 缓冲液中加入 TMAC，则可在温和条件下分离不同长度的 mRNA。

Column	BioPro IEX QF (5 µm), 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	A) 10 mM NaOH B) 10 mM NaOH containing 2 M NaCl
Temperature	15°C
Detection	UV at 260 nm

Column	BioPro IEX QF (5 µm), 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent	20 mM Tris-HCl containing 0.5 M TMAC (pH 8.1), NaCl gradient
Temperature	30°C
Detection	UV at 260 nm