技术信息
使用反相色谱柱分离多肽和蛋白质时，应根据目标物分子量与疏水性选择合适的孔径和官能团，再优化梯度斜率、流动相溶剂和柱温。
| 色谱柱 | 分子量越大，通常越适合大孔径、较低疏水性的固定相；易吸附样品可选用生物惰性硬件。 |
|---|---|
| 流动相 | 0.1% TFA/乙腈梯度可作为初始条件；可进一步调整酸种类、浓度、pH 或加入 2-propanol。 |
| 温度 | 高温对大分子蛋白峰形改善尤其明显，应选用具有高温耐久性的色谱柱。 |
分子量约 10,000 以下的多肽可优先选择孔径 12 nm 的 Triart C18/C8；更大的蛋白质需要孔径 30 nm 的大孔径色谱柱。Triart Bio C4 配合高温条件可用于分子量约 150,000 的抗体分析。
| Column | 150 X 3.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) water/TFA (100/0.1) B) acetonitrile/TFA (100/0.1) |
| Temperature | 40°C |
| Detection | UV at 220 nm |
高温可改变选择性并改善峰形，且分子量越大，效果越明显。YMC-Triart 具有较高耐久性，可在高温条件下进行稳定分析。
| Column | YMC-Triart C18 (1.9 µm, 12 nm), 50 X 2.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) water/TFA (100/0.1) B) acetonitrile/TFA (100/0.1) |
| Detection | UV at 220 nm |
常规条件分离不足时，可依次考察柱温、酸种类与浓度、梯度斜率及有机溶剂组成。
将 TFA 浓度或酸种类改为甲酸会改变选择性；同时减缓乙腈梯度可进一步提高分离度。
将乙腈改为 2-propanol/乙腈混合液并优化梯度，可在相近分析时间内提高分离度。
