色谱柱
YMC-Triart Bio C4是一款适用于蛋白质分离的有机杂化硅胶基质的大孔C4色谱柱。因可用于高温条件，因此可用于分子量到15万左右的抗体等蛋白质的分离。关于蛋白质的分析，由于该款色谱柱即使使用添加甲酸的流动相条件亦可获得良好的峰形，因此也非常适用于LC/MS的高灵敏度分析。该产品不仅适用于分离蛋白质、抗体，对在常规C18中保留过强难以分离的中小分子亦适用。
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规格 |
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基质 |
有机杂化硅胶 |
|---|---|
| 颗粒径 | 1.9 µm, 3 µm, 5 µm |
| 孔径 | 30 nm |
| pH使用范围 | 1～10 |
| USP Class | L26 |
下图考察了Triart Bio C4从40℃到90℃间的不同温度下对完整抗体的洗脱状况，从结果可以看出，相较于50℃为止基本无峰流出，在70℃及以上温度时可以获得良好的峰形。诸如此类抗体在反相分析中可能需要使用高温条件，耐久性卓越的Triart Bio C4可以很好的适用于此类条件，且即使是在90℃条件下亦可实现稳定的分析。
| Column | YMC-Triart Bio C4 (3 µm, 30 nm) 150 X 3.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) water/TFA (100/0.1) B) acetonitrile/TFA (100/0.1) 30-60%B (0-15 min), 90%B (15-30 min) |
| Flow rate |
0.4 mL/min |
| Detection |
UV at 220 nm |
| Sample |
Bevacizumab (0.5 mg/mL) |
| Injection |
4 µL |
在用反相色谱柱分析蛋白、多肽的LC/MS分析中，与添加TFA的流动相相比，更倾向于选择能提高LS/MS灵敏度的甲酸条件，但添加甲酸的流动相条件常常存在峰展宽的问题。 下图为使用添加TFA或甲酸的流动相条件分析抗体降解片段的分析结果。可以看到使用Triart系列色谱柱在添加甲酸的流动相条件下亦可获得良好峰形，可以很好的用于LC/MS的高灵敏度分析。
| Column size | 150 X 2.1 mmI.D |
|---|---|
| Eluent <TFA> | A) water/TFA (100/0.1) B) acetonitrile/TFA (100/0.1) 25-50%B (0-10 min), 90%B (10-12.5 min) |
| Eluent <Formic acid> | A) water/formic acid (100/0.1) B) acetonitrile/formic acid (100/0.1) 20-45%B (0-10 min), 90%B (10-12.5 min) |
| Detection | UV at 280 nm |
| Flow rate | 0.4 mL/min |
| Temperature | 80°C |
| Injection | 4 µL (0.25 mg/mL) |
| Sample | mAb subunit Standard (Waters社製) |
虽然高温条件下使用含TFA的洗脱液能改善多肽、蛋白的分析效果，但使用一般反相色谱柱常存在柱寿命问题。Triart系列因采用有机杂化硅胶为基质且进行致密的表面修饰，因此在如1%TFA、90°C的苛刻条件下亦有卓越的耐久性，因此可用于那些常规色谱柱难以使用的苛刻条件。
| 色谱柱性能评价条件 | |
| Column | 5 μm, 150 X 3.0 mmI.D. for C4 5 μm, 50 X 2.0 mmI.D. for C18 |
|---|---|
| Eluent | acetonitrile/water (60/40) |
| Flow rate | 0.4 mL/min for 3.0 mmI.D. 0.2 mL/min for 2.0 mmI.D. |
| Temperature | 37ºC |
| Sample |
butyl benzoate |
