Triart C18采用新开发的有机杂化硅胶为基质进行了致密的表面修饰,因此具有卓越的耐久性,适用pH条件宽泛且耐高温。红霉素在酸性条件下因存在不稳定易降解的问题,因此常用中性以上的pH条件进行HPLC分析。为获取良好峰形,进行该物质测定时常用高温条件。Triart C18因具有卓越的耐久性且适用于高温、高pH的苛刻条件,因此可进行稳定的分析。
pH7.9, 70℃的连续分析

1. Erythromycin (EA)
2. Erythromycin ethylsuccinate (EES)
3. Erythromycin estolate (EE)
| Column | YMC-Triart C18 (3 μm, 12 nm), 50 X 2.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | 20 mM KH2PO4-K2HPO4 (pH 7.9)/acetonitrile/methanol (40/45/15) |
| Flow rate | 0.2 mL/min |
| Temperature | 70ºC |
| Detection | UV at 210 nm |
常规C18色谱柱在100%水相条件下,常因填料表面的疏水性官能团与水存在互斥作用,不易浸润填料表面而影响其实际分离效果。Triart C18因填料表面C18密度进行了最佳化设计,具有适度的疏水性与亲水性,因此在100%水相下亦有良好的保留行为与再现性。
下图展示了100%水相条件下分离有机酸时保留时间的稳定性,可以看出泵停前后,保留时间基本都无变化,获得了稳定的分离。

1. Oxalic acid
2. Tartaric acid
3. Glycolic acid
4. Formic acid
5. L-Malic acid
6. Malonic acid
7. Lactic acid
8. Acetic acid
9. Maleic acid
10 . Citric acid
11 . Succinic acid
12 . Fumaric acid
13 . Acrylic acid
14 . Propionic acid
| Column | YMC-Triart C18 (3 μm, 12 nm), 150 X 3.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | 20 mM H3PO4 |
| Flow rate | 0.425 mL/min |
| Temperature | 37ºC |
| Detection | UV at 220 nm |
当使用比流动相溶剂洗脱力强的溶剂(如乙腈等)溶解样品进行分析时,如注入样品体积过大,可能会出现峰分叉等异常状况,从而限制了进样体积。孔径分布和表面修饰均一的Triart C18由于可承载以往硅胶类产品的2倍以上进样体积,因此可适用于低浓度的亲水性化合物或生物体样品等的大体积进样分析。
进样体积对峰形的影响


| Column | 5 μm, 50 X 2.0 mmI.D. or 2.1 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) water/formic acid (100/0.1) B) acetonitrile/formic acid (100/0.1) 5%B (0-0.5 min), 5-100%B (0.5-2.5 min) |
| Flow rate | 0.4 mL/min |
| Temperature | 40ºC |
| Detection | UV at 275 nm |
下图展示了LC/MS测定空白基线的TIC结果。在使用LC/MS进行检测中接色谱柱Triart C18测量的TIC与不连接色谱柱的情况相同,即未发现来自色谱柱的泄露(溶出)。使用这种低泄露的色谱柱,因其低背景噪音使其信噪比得到提升,从而易于获得更高灵敏度。
LC/MS泄露试验

| Column | 5 µm, 50 X 2.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) water/formic acid (100/0.1) B) acetonitrile/formic acid (100/0.1) 5%B (0-1 min), 5-100%B (1-5 min), 100%B (5-10 min), 100-5%B (10-10.1 min), 5%B (10.1-12.5 min) |
| Flow rate | 0.4 mL/min |
| Temperature | 40℃ |
| Detection | ESI positive, TIC (Mass Range: 50-1000) |
在蛋白、多肽的分析中,通过提高温度可能会改善选择性和峰形。常规色谱柱在添加了TFA的强酸性流动相条件下使用高温条件会存在寿命问题。有机杂化硅胶Triart C18因具有卓越的耐久性,因此可适合于高温条件。尽管Triart C18的孔径仅为12nm,但高温条件下可分离蛋白质的分子量高达3万。

| Column | YMC-Triart C18 (1.9 μm, 12 nm), 50 X 2.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) water/TFA (100/0.1) B) acetonitrile/TFA (100/0.1) 10-80%B (0-5 min) |
| Flow rate | 0.4 mL/min |
| Detection | 220 nm |