技术信息
siRNA 可切割与疾病相关的 mRNA 并抑制基因表达，是重要的核酸药物形式。siRNA 通常为约 20mer 的双链 RNA，在加热或碱性条件下会解链。根据分析目的，可以保持双链非变性状态，也可以将其变性为单链后分析。
使用生物惰性色谱柱 Accura Triart Bio C18 分析双链 siRNA、正义链和反义链。流动相使用 TEA 作为离子对试剂，并分别比较 HFIP 和乙酸。提高柱温后双链 siRNA 变性并以单链状态洗脱；酸种类和离子对试剂会改变分离及变性状态。生物惰性硬件可同时抑制磷酸基在金属表面的吸附。
| Column | Accura Triart Bio C18 (1.9 µm, 30 nm), 50 X 2.1 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) TEA with HFIP or acetic acid B) methanol |
| Gradient slope | 1%B/min |
| Flow rate | 0.42 mL/min |
| Detection | UV at 260 nm |
使用阴离子交换柱 BioPro IEX QF 时，在 pH 8.1 条件下双链 siRNA 在各温度下均以非变性状态洗脱。较低温度下，正义链和反义链可能形成局部双链结构并导致峰展宽；提高温度可减弱该结构，获得更尖锐的峰形。
| Column | BioPro IEX QF (5 µm), 100 X 4.6 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 1 M NaClO4 25-40%B (0-30 min) |
| Flow rate | 0.5 mL/min |
| Detection | UV at 260 nm |
